温和型干细胞消化液

温和型干细胞消化酶

产品名称：温和型干细胞消化酶产品规格：100ml
产品货号：JXS0501 储存条件：2-8℃保存，20℃长期保存

产品简介

温和型干细胞消化酶专门用于干细胞的消化，包括脐带间充质干细胞，脂肪间充质干细胞，
胚胎干细胞（ES）等。传统胰蛋白酶只要接触到细胞，就持续不断的切割蛋白的精氨酸及赖氨
酸C末端形成的肽键。温和型干细胞消化酶与胰蛋白酶的作用机理不同，它只消化细胞与细胞之
间，以及细胞与培养瓶之间的细胞外基质，而不损伤细胞膜的完整性，因此消化作用温和，对
干细胞的损害极小。即使消化时间超过10分钟，细胞活率仍可保持90%以上，对干细胞的后续
传代也几乎没有影响，减少了对操作人员技能的要求。

产品特点

1、即用型，无需配制，4℃保存。
2、操作便利，无需消化终止，细胞存活率高。
3、成分明确，纯人工合成，无任何动物源成分。
4、安全性高，更适合临床研究及药物申报用途。
5、避免了消化过度，使大规模干细胞生产成为可能。

细胞消化步骤

一、细胞消化前准备(以T25瓶为例)

1、观察贴壁细胞长至80%-90%左右，弃去细胞培养液。

2、用5ml无钙镁的HBSS溶液或PBS清洗贴壁细胞，弃去清洗液。

二、细胞消化过程(以T25瓶为例)

1、向T25瓶中加入1ml干细胞温和消化酶，置于37度培养箱中消化细胞。

2、约3min后，细胞变圆，立即加入5mLPBS溶液进行稀释。

3、将上述6mL含细胞液体转移至离心管中，置于离心机中离心1000rpm，3min

4、去除离心管中的上清液。

5、根据接下来的应用目的加入干细胞培养基(细胞传代用途)或细胞冻存液(细胞冻存用途)。

常见问题

Q：为什么要开发干细胞温和消化酶产品？
A：消化过度与生长过密是干细胞培养失败的前两大原因。在生产级的大规模培养中，消化过度更是
一个难以控制的工艺难题。温和消化酶就是为了解决这个问题而设计的：在该产品的消化时间挑
战实验中，浸润在温和酶中长达30min的干细胞，细胞活率均能保持在90%以上，表型正常，且后
续传代正常

Q：干细胞温和消化酶的保存温度条件是2-8℃。我如果-20℃保存，会不会更好？
A：该酶蛋白结构稳定，在2-8℃条件下也可稳定保存。若放置-20℃环境，应避免反复冻融问题，否则
会导致该酶活性下降，细胞消化时间延长。建议分装后置于-20℃长期保存。

Q：用无血清培养基及含血清培养基培养的干细胞，在使用温和酶消化方面有什么异同？
A：相同之处是：无论使用何种培养基，在消化前均需要使用无钙镁离子的缓冲液冲洗细胞。
不同之处：如果使用无血清培养基，清洗一次即可。如果使用血清培养基，应当连续清洗细胞三
次，以确保无血清残留，否则消化时间会变长。

Q：在消化时间方面，温和消化酶与传统胰酶有什么差别？
A：温和型干细胞消化酶在消化时间上要稍长一些。一般消化干细胞需要2-5min左右的时间。可根据
细胞状态及种类适当延长消化时间，且不会对细胞活性产生影响。传统胰酶要严格控制消化时间

Q：温和消化酶消化细胞后，需要添加培养基或胰酶抑制剂终止消化过程吗？
A：不需要。细胞变圆后添加细胞培养上清或PBS溶液稀释即可。

Q：添加完细胞培养上清稀释后，可不离心去除消化酶吗？
A：不可以。残留的消化酶会影响后续干细胞的培养过程，会导致干细胞的形态变化。