小鼠表皮干细胞分离培养及鉴定

【简介】

表皮干细胞（ESCs）是一类具有无限增殖能力，可增殖分化为表皮中各种功能细胞的细胞群，主要位于表皮基底层，属于成体干细胞，具有很强的分裂增殖能力，以补充衰老脱落的角质细胞。表皮干细胞具有干细胞的特征：未成熟、体积小、细胞器小、克隆形成能力高、细胞周期慢、无限次分裂等；

【材料】

1d小鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBS、FBS、培养皿、15ml离心管、胰酶；

【方法】

1、无菌条件下取新生鼠背部皮肤，PBS冲洗3次；

2、用0 .25%胰酶4℃消化一夜，分离表皮与真皮；

3、用0 .25%胰酶和0 .01%EDTA37℃消化表皮，5倍体积的完全培养基终止消化；

4、1200rpm转速下离心8min，弃上清，重悬细胞获得表皮干细胞单细胞悬液。接种于培养板，37℃，5%CO2培养箱中培养；

【培养】

干细胞专用培养液

【鉴定】

1）荧光鉴定

阳性：CD44、CD90；

阴性：CD34、CD45；

2）三项分化

进行成脂、成骨、成软骨诱导鉴定；