兔纤维环干细胞的分离培养及鉴定

一、材料：

3-8周龄兔、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBS、M199、FBS、培养皿、15ml离心管、干细胞专用培养液；

二、方法：

1)下取白兔的椎体，剔除周围的肌肉和韧带,完整取出各段的椎间盘，将其放入含有5％双抗低糖DMEM培养基中，将椎间盘移至超净台中，将髓核移除，获得的纤维环组织；

2）用PBS清洗3遍 ，将其剪成1mm×1mm×1mm大小的组织，加入质量浓度为0.2%I型胶原酶，放置于37℃和5％CO2的培养箱中 每隔1h吹打1次，待组织块完全消化后，终止消化使用200目网筛过滤；

3）PBS重悬，1000r／min离心 5 min，重复2次，种盘；