豚鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养

【简介】

骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞，对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潜能，能促进间充质组织的再生，如：骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质等组织;

【材料】

2-6周鼠，超净台、PBS、废液桶、75%酒精、手术包、percoll分离液、培养基、培养瓶等；

【方法】

1）豚鼠处死后, 放入75% 的酒精内浸泡15 min，无菌条件下取出双侧股骨、胫骨、肱骨，去除附带组织,浸入生理盐水中清洗2次；

2）无菌间内，超净台上，将长骨从中间剪断，无血清DMEM冲出骨髓，装入两离心管中以1000rpm×5min离心，去除上清；

3）4ml无血清DMEM重悬，轻铺于等量的密度1.073g/ml Percol 分离液上（4ml:4ml），3000rpm×30min离心，小心吸取中间白膜层，无血清DMEM10倍体积稀释，1000rpm×4min离心2遍；

4）干细胞专用培养液重悬种盘；

【培养】

干细胞专用培养液

【鉴定】

四、鉴定

免疫荧光：

阳性：CD44、CD90；

阴性：CD34、CD45;

功能鉴定：

成骨、成脂、成软骨诱导；