兔肺成纤维细胞分离培养及鉴定

【简介】

体外培养的成纤维细胞多为梭形、多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变，成纤维细胞是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；

【材料】

75%酒精、PBS、手术剪、手术镊、EP管、含15%FBS的DMEM（或1640）；

【方法】

1、处死兔，开胸腔，取肺组织；

2、PBS洗净血液，剪碎组织，PBS清洗400R/3min，两次以上，上清清澈为止；

3、剪碎的组织块加入0.25%的DNaseⅠ4ml，再加入0.25%的胰蛋白酶消化组织碎块20min，消化后吸打消化液，静置2min，取上清，未消化的组织再次加酶液消化20min；

4、取得的上清合为一管，加等量含血清培液终止消化，依次过70um、40um网筛，细胞悬液1500r / 5min，弃上清，加培液再次离心一次，培液重悬沉淀；

5、细胞悬液种入培养皿，37°静置培养30-60 min后轻轻倾斜培养皿，去悬液，补足培液继续培养，贴壁细胞为肺成纤维细胞；

【培养】

DMEM/F12+10%FBS+1%双抗

【鉴定】

阳性：波形蛋白（Vimentin）；肌动蛋白（α-MSA）；