兔脂肪间充质干细胞分离培养及鉴定

【简介】

脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。

【材料】

2把眼科直剪，1把弯镊、2支左右15mL离心管、6cm或10cm Dish、70um网筛、含10%FBS 的DMEM干细胞专用培养基、双抗PBS、75%的酒精、0.06%胶原酶I；

【方法】

1）白兔用速眠新以0．2 mL／kg的剂量麻醉；

2）切取腹股沟处脂肪组织，去除肉眼可见的血管和筋膜组织，PBS冲洗；

3）剪成1mm³的组织块，移入15ml离心管，加入0.06%胶原酶I，37°温箱消化50min；

4）消化后向管内加1~2倍体积PBS吹打消化液，过70um筛网，1000RPM/5min，弃上清和脂肪层，再加入PBS重悬细胞沉淀重复离心1~2次；（离心管内会有很多油，PBS清洗多次还是去除不掉，重悬细胞沉淀时多注意，尽量避免脂肪混合培液）

5）专用培养液重悬后移入培养皿，37°温箱，5%CO₂培养，24h后PBS清洗换液；

代;

【培养】

干细胞专用培养液

【鉴定】

流式细胞鉴定：

阳性：CD29、CD90、CD44、CD105、CD166、CD13;

阴性：CD34、CD45、CD80、CD86、CD117;