兔胰腺上皮细胞的分离培养及鉴定

【简介】

上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞，上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能；胰腺的内分泌物主要有胰岛素、胰高血糖素、胃泌素及生长抑素等，与机体内的营养代谢及调节有关；

【材料】

动物：2-20周龄兔；

器械耗材：手术剪、手术镊、 15ml离心管试剂、75%酒精、DMEM、双抗、PBS、胶原酶、胰蛋白酶、上皮专用培养液；

【方法】

胶原酶联合胰酶消化法

1）兔处死，取出胰腺组织，剪碎，PBS清洗；

2）组织碎块加入混合酶进行消化，组织消化完后收集细胞悬液；

3）细胞悬液离心，收集沉淀，再用PBS重悬离心；

4）上皮专用培养液种细胞，37℃,5co2，48小时首换液；

【培养】

上皮细胞专用培养液；

【鉴定】

1）免疫荧光

阳性：角蛋白18（Cytokeratin 18）

阴性：vimentin