大鼠小胶质细胞分离培养及鉴定

【简介】

小胶质细胞是调节大脑发育、维持神经网络和损伤修复的大脑常驻细胞，在大脑正常发育过程中起着不可或缺的作用，对脑组织尤其是神经元起着营养、支持、保护、监视等作用并能根据微环境的不同向不同方向发展；小胶质细胞对维持大脑的稳态及神经系统发育、突触传递、神经系统内环境的稳定及新陈代谢等中枢神经系统的多种正常生理活动以及神经疾病的病理机制中都起着十分重要的作用；

【材料】

一）器械灭菌：

手术器械： 2把眼科直剪，2把弯镊、2支左右1.5mL离心管、6cm或10cm Dish；

二）溶液准备：

DMEM/F12培养基、双抗PBS、75%的酒精、FBS、胰酶；

【方法】

1）3只新生1～2d大鼠75%酒精消毒后， 无菌条件下开颅取出脑组织，放在提前预冷的D-Hanks液中剥离血管与脑膜并去除所有出血点，将皮质和海马移到呈有D-Hanks液的 15 mL 离心管中；

2）用 1 mL 移液枪轻轻吹打数下加入0.25%胰酶并轻轻吹打混匀，而后将离心管放入37℃中3min，待液体呈流水状，基终止消化；

3）终止后的液体通过70μm细胞筛过滤，收集过滤后的液体并1000 r/min，5 min离心；

4）DMEM/F12清洗2次后细胞种盘,24小时第一次换液，第5天再换液，培养第 8 天时，细胞明显分层生长，用10%FBS的DMEM/F12 培养基换液；

5）第9天，将培养基从培养瓶中移到离心管中放入培养箱中培养，再将新的10% FBS的DMEM/F12培养基注入培养瓶，置于37 ℃恒温摇床（200 r/min）震摇2 h，收集散落细胞，直接接种至培养瓶或孔板中，同时在原混合培养瓶中加入20%FBS 的DMEM/F12培养基继续培养5d后可收获第2批小胶质细胞；采用差速贴壁25 min后倒掉新孔板中的培养基，将提前准备好的第8天换液培养基离心后加入养瓶或孔板中，24h后全换液；

【培养】

DMEM/F12完全培养基

【鉴定】

1）免疫荧光：

阳性：Iba1