免疫荧光技术服务

免疫荧光技术服务
（DH0014）

 
一、服务介绍
       免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展*早的一种。将抗原或抗体用荧光素进行标记，标记的抗原或标记的抗体与相应的抗体或抗原反应 后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术称为免疫荧光素技术。免疫荧光细胞化学分直接法、夹心法、间接法和补体法。
 
二、服务内容及价格

服务编号	服务内容	服务价格	服务周期（工作日）
DH0014-01	免疫荧光单标记检测	咨询	咨询
DH0014-02	免疫荧光双标记检测	咨询	咨询

 
三、客户提供
1、细胞株或细胞爬片。注：细胞爬片不宜太密；
2、荧光检测所用的抗体
3、实验前，客户需告知具体的细胞处理方式及详细要求。
注：若有特殊处理的样品，请尽可能出示相关材料（具有保密性的材料除外）。
 
四、服务流程
免疫荧光单标记方法
免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。
1、所需材料与试剂
a, 培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。
b, 一抗、FITC或TRITC标记的二抗。
c, 4%多聚甲醛固定液或冷**固定液 (-20℃预冷20 min)。
d, 封闭液。
e, 0.01mol／LPBS缓冲液。
2、染色方法
a, 取出培养有细胞的盖玻片，用0.01MPBS洗2-3遍。
b, 加入4%多聚甲醛试问固定30 min
c. 加入0.05%的Tritonx-100, 37℃, 5min，PBS洗两次，5min/次
d. 加入含0.5%NS、1%BSA的PBS中室温封闭30min-1h。
e. 去封闭液，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃过夜。抗体以0.01 mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。
f.  PBS洗三次，10min/次
g. 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。
h.  PBS洗三次，10min/次，用滤纸吸干。
i.  50%甘油(PBS配制)封片。
j.  免疫荧光显微镜下观察，或于4℃避光保存。
免疫荧光双标记方法
免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子，当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些，应注意所用的一抗是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如：A抗体为多克隆抗体，来自家兔；B抗体为单克隆抗体，来自小鼠)。其次，两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠，且尽量远离，通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下，染色时两种一抗可以同时孵育，然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱，而另一种颜色比较强时，应考虑先孵育颜色较弱的二抗。其他步骤同免疫荧光单标记。
 
五、提交给客户结果
基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析，荧光显微镜拍摄
 
六、服务项目说明
1.实验周期：具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
2.对实验有特殊要求，请另询价。

3.双方签订合同后，收取50%首付后启动实验。

七、实验结果展示